Η μονάδα Κυτταρομετρίας ροής περιλαμβάνει εξοπλισμό και λογισμικό ικανό να υποστηρίξει μελέτες φαινοτυπικής και λειτουργικής ανάλυσης συμπεριλαμβανομένου του χαρακτηρισμού υποπληθυσμών κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος σε in vitro και in vivo μοντέλα, την ανάλυση του κυτταρικού κύκλου, τον προσδιορισμό κυτταρικής νέκρωσης και απόπτωσης, πρωτόκολλα μελέτης του μεταβολισμού κλπ.
Ο διαθέσιμος εξοπλισμός υποστηρίζει πρωτόκολλα διαχωρισμού κυττάρων για περαιτέρω αναλύσεις, όπως RNA-seq και πρωτόκολλα λειτουργικής διαφοροποίησης.
Η μονάδα υποστηρίζει την εκπαίδευση νέων χρηστών, τον σχεδιασμό πρωτοκόλλων, καθώς και την ανάλυση των δειγμάτων αλλά και των αποτελεσμάτων.
Υποδομή Κυτταρομετρίας Ροής και Κυτταροδιαχωρισμού
Ο εξοπλισμός αποτελείται από τα εξής μηχανήματα: BD FACSCALIBUR 4CS IVD, BD FACSARIA Ι and BD FACSMelody.
BD FACSMelody
Στο BD FACSMelody δύναται να γίνει ταυτόχρονη ανίχνευση 11 παραμέτρων και διαχωρισμός έως και 4 πληθυσμών ταυτόχρονα (4 way-sorting), ενώ η τοποθέτησή του σε θάλαμο κάθετης νηματικής ροής βιοασφάλειας τάξης ΙΙ και η δυνατότητα του απομάκρυνσης σταγονιδίων (Aerosol Management System) διασφαλίζουν τον διαχωρισμό των κυττάρων υπό άσηπτες συνθήκες.
BD FACSARIA Ι
BD FACSCALIBUR 4CS IVD
Το BD FACSCALIBUR χρησιμοποιείται από ανεξάρτητους χρήστες μετά από εκπαίδευση.
Υποδομή ανάλυσης εξωκυτταρικών κυστιδίων / εξωσωμάτων / νανοσωματιδίων
Η ανάλυση παρακολούθησης νανοσωματιδίων (Nanoparticle Tracking Analysis, NTA) με το Malvern NanoSight NS300 είναι μία βιοφυσική μέθοδος χαρακτηρισμού νανοσωματιδίων σε διάλυμα, που βασίζεται τόσο στις ιδιότητες της σκέδασης του φωτός όσο και της κίνησης Brown. Εν συντομία, κατά τη διάρκεια της μέτρησης, τα σωματίδια οπτικοποιούνται από το φως που σκεδάζεται μετά από ακτινοβόληση με μια δέσμη λέιζερ. Το φως αυτό εστιάζεται από ένα μικροσκόπιο σε μια κάμερα που καταγράφει την κίνηση των σωματιδίων. Το λογισμικό NTA παρακολουθεί την τυχαία θερμική κίνηση κάθε σωματιδίου, γνωστή ως κίνηση Brown, για να καθορίσει τον συντελεστή διάχυσης που χρησιμοποιείται για τον υπολογισμό του μεγέθους κάθε σωματιδίου χρησιμοποιώντας την εξίσωση Stokes-Einstein. Έτσι, το NTA επιτρέπει την απεικόνιση των νανοσωματιδίων σε πραγματικό χρόνο και τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης και της κατανομής του μεγέθους τους.
Σύστημα μέτρησης κατανομής μεγέθους σωματιδίων και συγκέντρωσης με Nanoparticle
Tracking Analysis MALVERN, Model NanoSight NS300.
Χαρακτηριστικά
- Αυτοματοποιημένη ανάλυση της κατανομής μεγέθους και της συγκέντρωσης νανοσωματιδίων με διάμετρο από 10 nm έως 2000 nm σε υγρό εναιώρημα.
- Η σκέδαση του φωτός των σωματιδίων, ο φθορισμός και η κίνηση Brown καταγράφονται σε βίντεο με τη χρήση μικροσκοπίου μεγέθυνσης 20x και τοποθετημένης κάμερας sCMOS.
- Έλεγχος θερμοκρασίας: 5°C κάτω της θερμοκρασίας περιβάλλοντος έως 50°C.
- Οι φθορίζουσες ετικέτες μπορούν να αναλυθούν με χρήση λέιζερ διέγερσης 405 nm (Violet) και 532 nm (πράσινο) και 642 nm (κόκκινο).
- Η προσθήκη αντλίας σύριγγας επιτρέπει την αυτοματοποιημένη πολλαπλή ανάλυση με σταθερό ρυθμό ροής μαζί με δυνατότητα ανάκτηση του δείγματος.
- Τα όργανα NanoSight μπορούν να εργαστούν με συγκεντρώσεις σωματιδίων στο εύρος ~107-109 σωματίδια/ml, που είναι περίπου 20- 100 σωματίδια στο οπτικό πεδίο.
Αναλυτικά το σύστημα περιλαμβάνει:
- Βασική μονάδα NS300
- Κάμερα High Sensitivity
- Πηγή Laser 532nm (green)
- Πηγή Laser 405nm (violet)
- Πηγή Laser 642nm (red)
- Τροχός φίλτρων
- Αντλία σύριγγας
- Κιτ αντλίας σύριγγας
- Λογισμικό λειτουργίας
- Η/Υ
- Εγχειρίδια χρήσεως/λειτουργίας.
Τεχνολογία και Software
Κατά τη διάρκεια ενός πειράματος, η κάμερα ανιχνεύει και καταγράφει τα σωματίδια που κινούνται μέσα στην κυψελίδα ροής. Το λογισμικό ανάλυσης παρακολουθεί τα μεμονωμένα σωματίδια που παρατηρούνται.
Εναλλακτική προβολή: Διάγραμμα της συγκέντρωσης (αριθμός σωματιδίων) με τη μεταβαλλόμενη ένταση του σήματος και τη διάμετρο των σωματιδίων
Εφαρμογές
- Χαρακτηρισμός κυτταρικών κυστιδίων - μέγεθος και συγκέντρωση μικροκυστιδίων, εξωσωμάτων, νανοσωματιδίων.
- Συσσωμάτωση πρωτεϊνών – διαστάσεις και μέτρηση της πολυδιασποράς πρωτεϊνών
- Συστήματα χορήγησης φαρμάκων, σωματίδια με βάση πολυμερή, φορείς με βάση λιπίδια, σωματίδια που μοιάζουν με ιούς.
- Ανάπτυξη εμβολίων και φαρμάκων - χαρακτηρισμός της αποικοδόμησης και της συσσωμάτωσης των θεραπευτικών πρωτεϊνών.
